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首页 > 拜谱生物 > 干货分享 > DIA核蛋白组学证明:绞股蓝皂苷GP5凭借激发自噬合理调控炭疽菌

DIA蛋白组学揭示:绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬有效控制炭疽菌

发布时间:2024-12-03
炭疽病由炭疽菌属吸引,是各国最紧迫性的藤本花草冷害产品之一,兼具强损害性、遍布广、感柒面积大等的特点。无机化学消菌的剂仍是现如今有机废气炭疽病的主要的方法手段,但过度使用出现病源体抗药效、区域环境严重污染和肉制品可靠等的问题。藤本花草是先天抗病菌类物质的宝库,设计藤本花草源消菌的剂兼具选购性强、对非的目标生物技术比可靠、节能减排等强势。

2024年11月烟台先进材料与绿色制造山东省实验室杨军丽钻研员微商团队在Postharvest Biology and Technology杂志上发表题为“Gypenoside GP5 effectively controls Colletotrichum gloeosporioides, an anthracnose fungus, by activating autophagy”文章。研究利用DIA蛋白质组学技术,揭示了绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬机制有效控制炭疽菌的机理,为防治炭疽病提供了新的思路。拜谱生物为该研究提供了DIA蛋清组学水平服务。

繁体中文关键词:绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬有效控制炭疽病真菌Colletotrichum gloeosporioides

中文核心期刊:Postharvest Biology and Technology

2026年干扰细胞:6.4

收录时段:2024年11月

用户企事业单位:烟台先进材料与绿色制造山东省实验室

设计涂料:绞股蓝皂苷GP5处理后的炭疽病真菌C. gloeosporioides

拜谱带来工艺:DIA核蛋白组学

实验要点:

研究方案没想到

GP5对炭疽菌的缓和的功效

通过 菌丝发育带宽法测定化合物GP4-GP7对菌丝生长的抑制作用,结果显示GP4-GP7的EC50值分别为96.98、27.5、38.48和61.59 mg/L。其中,GP5表现出最强的抑制效果,在12.5 mg/L浓度下,其抑制效果显著优于其他化合物。当GP5浓度为25 mg/L时,对炭疽菌的抑制率接近50%。此外,GP5的抗真菌活性超过了常用的化学农药百菌清和植物源农药苦参碱(图1)。

图1 GP5还有其构造是类似的性有机物对球孢梭菌菌丝种植的作用

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

通过光学显微镜观察,发现在GP5浓度为EC50时,孢子萌发受到明显抑制;而在400 mg/L浓度下,孢子完全不萌发。培养8小时后,GP5处理组的孢子萌发率显著低于对照组。在400 mg/L浓度下,孢子芽管长度仅为11.11 μm,而对照组的芽管长度已达到92.70 μm。这表明GP5能够有效抑制炭疽菌孢子的萌发和芽管伸长(图2)。

图2 用EC50和400mg/L有机废气浓度清理GP5后的孢子不断涌现和芽管间距

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024) 实验表明,GP5就能有效率抑止iPhone75、夏黑提子和番茄上的炭疽病斑扩大。当GP5酸度实现500 mg/L时,iPhone75、夏黑提子和番茄的炭疽病能够引起病发的率差异性大大减少。在1000 mg/L酸度下,GP5对iPhone75、夏黑提子和番茄的炭疽病都会有差异性抑止效应(图3)。

图3 GP5可仰制球孢梭菌对成就感果种的毒力

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

GP5进行处理后炭疽菌菌体变事情

通过扫码智能电子光学显微镜(SEM)和散发出电子为了满足电子时代发展的需求,显微镜(TEM)观察,发现GP5处理后的炭疽菌菌丝部分脱水,细胞壁结构发生变化(图4)。在400 mg/L浓度下,GP5处理的菌丝细胞壁粘附增强。TEM观察显示,GP5处理后,细胞内的线粒体结构变得模糊,线粒体嵴断裂,细胞器结构难以辨认,并且出现了自噬体和自溶酶体。这些结果表明,GP5通过诱导自噬导致细胞死亡,从而发挥抗菌作用。

图4 GP5清理后的电镜观测

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

通过荧光显微镜观察,发现GP5处理后的炭疽菌细胞中出现大量红色荧光,表明存在大量的酸性囊泡结构,如自噬体和溶酶体(图5)。这与之前的TEM观察结果一致,证实了GP5诱导的自噬现象。此外,GP5处理后,细胞内钙离子(Ca2+)浓度升高,进一步激活自噬系统。

图5 GP5治療后的AO刺绣

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

通过JC-1刺绣法检测线粒体膜电位,发现GP5处理后,线粒体膜电位显著下降。随着GP5浓度的增加,红色荧光逐渐减弱,绿色荧光逐渐增强,表明GP5能够诱导线粒体膜损伤,破坏线粒体功能,进而触发线粒体自噬(图6)。

图6 内部内Ca2+氨水浓度和线粒体膜电势差影响

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

核蛋白组学定量分析

通过DIA蛋清质组学技能,发现GP5处理后,炭疽菌中有271个蛋白质表达发生显著变化,其中214个上调,57个下调(图7)。GO功能分析显示,差异表达蛋白主要参与代谢过程和细胞过程。KEGG通路分析显示,差异表达蛋白主要富集在有机物质代谢、细胞氮化合物代谢和基因表达等途径。特别是,自噬相关蛋白Atg8的表达上调,进一步证实了GP5通过自噬途径发挥抗真菌作用。

图7 血清质组学结局

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

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研究发现绞股蓝皂苷GP5能够有效抑制炭疽菌的生长和致病性。通过体外实验,GP5显著抑制了炭疽菌菌丝的生长和孢子萌发,其效果优于常用的化学农药氯噻酮和植物源农药苦参碱。进一步的电镜观察和蛋清组学分析显示,GP5通过激活自噬途径,诱导细胞内自噬体和自溶酶体的形成,从而导致炭疽菌细胞死亡。

图8 GP5抗衡C. gloeosporioides的抗细菌制度。

(图源:Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024)

拜谱个人总结

研究采用DIA蛋白酶组学,揭示了绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬机制有效控制炭疽菌的机理。这一发现不仅为防治炭疽病提供了新的思路,还展示了DIA蛋白组学在植物病理学研究中的强大应用潜力。拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司,率先引进赛默飞最新一代质谱仪Astral,并且专家团队总结多年DIA蛋白组项目经验,结合Astral质谱仪高稳定性、高灵敏度、高通量、高深度的特性对样品制备、分离技术、算法软件、实验设计全流程进行多维迭代更新,助力蛋白组学检测。此外,拜谱生物还提供转录组学、翻译工作后装饰组、分解组学以及多个学联席好产品技术服务,欢迎致电咨询!

参考资料文献综述:

Liu Y, Li X, Gong C, et al. Gypenoside GP5 effectively controls Colletotrichum gloeosporioides, an anthracnose fungus, by activating autophagy[J]. Postharvest Biology and Technology, 2025, 220: 113305.
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