单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抵抗能力植物物种特喜欢的人、寡核苷酸淡化资金非常高或操作方法工作流程僵化。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯院士人员在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低投资成本、跨植物物种、全app兼容的全新解决方案。

杂志简单

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国地理学探究课院显性基因与发育成熟海洋原子怪物体学地理学探究科研院和国显性基因探究会主办人的国际金学术性界中文核心学术刊物，致力于打造打造于通讯稿人的一生地理学探究课和药学显性基因学业务方面的原创文章性地理学探究探究成效。JGG 202几年度印象成分7.1，Scopus学术性界中文核心学术刊物评议指标图CiteScore 9.9，稳居JCR 202几年度GENETICS & HEREDITY业务方面Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY业务方面Q1区，稳居国地理学探究课院中文核心学术刊物区分海洋原子怪物体学商品类别1区(Top中文核心学术刊物)，显性基因学和血生化与原子海洋原子怪物体学小类双1区。

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什么样是HEATag

精巧的“二一体”设计制作

HEATag是由凝集素和HUH内切酶定义的融成蛋清

「位置定位器」摸块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化掩盖（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「对接器」模块电源 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）目录长形码开展共价连入。

“1+1>2”的成果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样品标示与产品追溯。

Fig1: HEATag许多标记图片作用提醒图

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实战技巧检验员

HEATag倒底有点能打？

可以在各种不同的条件下，满足蒲乳期甲壳动物肿瘤神经细胞系单肿瘤神经细胞混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。理论研究人员为 HEATag 装置了多轮 “气压试验”，从组织系到组织核，从常溫到超高温，从新鲜样版到一定样版，全定位手机验证它的相对稳明确和安全经济性。

首轮测试英文对应蒲乳期绿色组织受损神经元系：研发人士的选择了基人、鼠、仓鼠5个种群的四种方式组织受损神经元（HEK293T、K562、MEF、CHO），在空调温度下能 HEATag 标示后分层测序。结果回收处理的 11447 个组织受损神经元中，85.66% 都能确认 HEATag 条状码准确的筛选到原种群，样板间相交生态破坏较少，UMAP 聚类介绍法介绍不仅直接性证明书，HEATag 条状码与种群特喜欢的人人类基因组症状长度一样的。 继续，考试能力进第一步强制升级：设计人数体验在 4℃下图标刚采血生殖血癌组织细胞、在环境温度下图标甲醇统一住血生殖血癌组织细胞，有的简单图标血生殖血癌组织细胞。可是还是出众：全部能力下，样品标签纸与动物群信心均具有着比较好的一些性，转换合理率超 95%。即使是甲醇统一住会产生不严重的转录本交叉的情况影响，血生殖血癌组织细胞配制就有极富 RNA 损失，血生殖血癌组织细胞类型、的引用可是还是与刚采样品恢复同样，证明材料 HEATag 都可以图标不同的加工处理能力下的实验设计样品。

Fig2: HEATag 可在不一样生活条件下到位单体细胞转录组混样概述

就可以标示喂奶哺乳软体动物和深海无脊椎神经哺乳软体动物的原代内部

假设说细胞核核系检测是 “基础知识题”，那组织性样版就会 “扣除题”， 以下样版恰恰恰因细胞核核型复杂的、坏境应用性独特，当上标签技巧的 “困惑”，而 HEATag 恰恰恰在以下 “困惑” 上表现了优势与劣势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸策划 ，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不能被最准确辨认，几乎所有最主要的細胞型号的聚类分析法导致都清淅可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海上动物的配适性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长形码与外来物种转录组含有较高统一性，不造成因高盐情况出现的 “标识没有效果”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可体现哺乳期间小动物聚集样表多方面 scRNA-seq 探讨

Fig4: HEATag可达成新鲜松茸深海无脊柱爬行动物多个 scRNA-seq 分享

HEATag与神经细胞的配合都不会引发的转录组的重要变换

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在顺利完成图标目标任务的此外，不易对后期的的转录类物质析可能会导致侵扰，确保了分析数据分析的真实可靠性。

Fig5: HEATag不太会导致模本的 RNA 表达方式基本模式

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十年后的中国可期

HEATag 能为单上皮细胞的研究引致什么呢？

HEATag 的价值量，远只有于 “解决处理箭头事情”，它的灵巧性和共通性，正在慢慢为单上皮细胞调查张开比较多机会

从用途3d场景来瞧

HEATag 能扩大从 “容易相比介绍”（如癌安排与正确安排、肿瘤药物加工处理与对应）到 “大的大规模理论设计”（如安排组织图谱绘出、mtk量筛分）的全空间消费需求。现在 PIP-seq、Stereo-cell 等轻型可初始化技术设备的发展方向，HEATag 还能进的一步改善单组织理论设计的通量，机械助力研究组织抓好更强的大规模的工程。

从跨方面潜能来了解

HEATag 不仅仅可中用于转录组学，还能与表观什么是基因组学、蛋清质组学、服务器组学等系统融合，利用订制指数和寡核苷酸队列，HEATag 也可以轻易立足不同于的组学操作流程，不决定移动信号捕捉深度的。另外，应用于HEATag还也可以开发单生殖细胞糖组学研究方案系统。

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合作协议动态信息

拜谱生态学与陈凯教学完成率阶段性的项目合作但这并

什么值得私信的是，在 HEATag 工艺凸显出可观用途潜力股的后台下，拜谱菌物体已与我国南方浅海能物理学与项目 全国检测室（苏州）陈凯教受确立分式的运算区域合作意想。两者记划围绕着 HEATag 工艺的第三工业化起飞、成果转化业务导出等的方向展平深浅区域合作，促进改革某种低生产成本、跨鱼类的单组织生殖神经元标出工艺更快用途于其实成果转化业务场合，为较多检测室供给高效性、城市发展的单组织生殖神经元研发的工具，保驾护航成果转化业务业务者在组织生殖神经元菌物体学、浅海能菌物体学、皮肤疾病新机制等层面拥有较多超越